Detectie van Dengue NS1 met behulp van ultragevoelige ELISA met Thio-NAD Cycling

1. Inleiding

Dengue-koorts is een acute infectieziekte die wordt veroorzaakt door deHet knokkelkoortsvirusdoor de beet van een besmette Aedes-soort (Ae. aegypti of Ae. albopictus) mug,met de belangrijkste symptomen zoals hoge koorts, duizeligheid, hoofdpijn, huiduitslag enErnstig pijnen (oog-, spier-, gewrichts- of botpijn), enz. Deze ziekte komt veel voor in tropische en subtropische klimaten. Naar schatting 100 tot 400 miljoen mensen per jaar worden besmet, waarvan meer dan 80% meestal mild en asymptomatisch is. Desalniettemin kan ernstige knokkelkoorts het risico op overlijden verhogen als het niet goed wordt behandeld. Een vroege diagnose van deze ziekte is dus belangrijk voor de tijdige behandeling ervan.

Opmerkelijk is dat niet-structureel eiwit 1 (NS1), een sterk geconserveerd glycoproteïne, voornamelijk wordt uitgescheiden tijdens de infectie vanDenguevirus, die intensief wordt beschouwd als de belangrijkste pathogenese vanDengue. Daarom wordt NSI over het algemeen gebruikt als biomarker voor de vroege opsporing van deze ziekte.

In deze studie werd een sandwich-enzymgekoppelde immunosorbenttest(ELISA) in combinatie met dethio-nicotinamide-adenine-dinucleotide (thio-NAD/S-NAD)Fietsmethode ( hierna ultragevoelige ELISA genoemd ) wordt gebruikt om NSI te detecteren, gevolgd door de vergelijking met NAAT om de detectienauwkeurigheid te bevestigen.

2. Voor- en nadelen van traditionele detectiemethoden voorDengue 

Op dit moment is tHier zijn vier belangrijke detectiemethodenvoor Dengue.


Virale isolatie en identificatie hebben een hoge specificiteit, maar zijn tijdrovend en nemen minstens 5 dagen in beslag. De snel antigeen test is de snelste en meest kostenefficiënte van de andere methoden, maar de gevoeligheid en specificiteit zijn relatief laag. Serologische test op basis van IgM en IgG wordt beperkt door het aantal dagen van besmetting, zoalsdetest moet worden uitgesteld tot het niveau van de antilichamen stijgt tot een detecteerbaar niveau.

In de kliniek wordt NAAT vaak toegepast om te bepalenDengue door vuil van zijn hoge gevoeligheid en specificiteit. Deze methode is echter duur, arbeidsintensief en vatbaar voor valse positiviteit, die moet worden uitgevoerd door het getrainde personeel.Om de nadelen van deze methoden te ondervangen, is een nieuwe detectiemethodeultragevoelige ELISA is toegepast in deze studie.

3. Workflow van ultragevoelige ELISA met thio-NAD-cycli

Een paar antilichamenisgebruikt voor het opvangen van het NS1-eiwit in de sandwich-ELISA en alkalische fosfataseisgelabeld op het secundaire antilichaam. Afgezien van de antilichamen, een androsteronderivaat, 3α-hydroxysteroïdedehydrogenase, thio-NAD en NADHzijngebruikt om het thio-NAD-enzymcyclussysteem te construeren. Tijdens de thio-NAD-cyclusreactie accumuleerde thio-NADH constant in een driehoekig getal en kon direct worden gemeten bij een extinctie van 405 nm.

4. De vergelijking van ultragevoelige ELISA en NAAT bij de detectie van Dengue NS1 Proteïne

In NAAT zijn 60 monsters dengue-positief en 25 dengue-negatief. De NAAT-cyclusdrempelwaarde (CT) van die dengue-positieve monsters varieerde van 12,42 tot 31,41.In de ultragevoelige ELISA zijn 59 monsters overeenkomstig positief voor de NAAT-resultaten, terwijl 25 monsters volledig overeenkomstig negatief zijn voor de NAAT-resultaten.

Vergeleken met NAAT zijn de sensitiviteit en specificiteit van de ultragevoelige ELISA respectievelijk 98,3% en 100% (tabel 2). Van de 60 door NAAT bevestigde dengue-positieve patiëntmonsters is slechts 1 monster negatief in de ultragevoelige ELISA. De NAAT-gegevens toonden aan dat het monster een type 4 DENV-infectiegeval is met een CT-waarde van 21,59. De resultaten van de ultragevoelige ELISA komen vrijwel perfect overeen met de NAAT-resultaten, met een kappa-waarde van 0,972 (95% BI: 0,917-1.0).

5. Conclusie

UDe ltrasensitieve ELISA-methode is eenvoudig uit te voeren en vereist geen professionele stagiairs om te bedienen. TDe detectie kan onmiddellijk worden gestart na ontvangst van een klein monster.Het is bijzonder geschikt voor de vroege opsporing vanDengueziekte bijlage-inkomenslanden.

Referentie

Chen, Po-Kai et al. "Geavanceerde detectiemethode voor Dengue NS1-eiwit met behulp van ultragevoelige ELISA met Thio-NAD-cycli." Virussen vol. 15,9, 1894. 8 september 2023, doi:10.3390/v15091894

Productvoordelen en kenmerken vanBONTAC Thio-NAD/S-NAD

Bontac  is oEen van de weinige ondernemingen in deChinadie Thio-NAD kan producerenmet"Bonzyme" Volledige-enzymatische methode (Milieuvriendelijk;Geen schadelijke residuen van oplosmiddelen) en unieke "Bonpure" zeventraps zuiveringstechnologie. BONTAC verenigt R&D, productie en verkoop, met eigen fabrieken en een aantal internationale certificeringen om een hoge kwaliteit en stabiele levering van producten te garanderen.

 

Disclaimer

BONTAC aanvaardt geen verantwoordelijkheid voor claims die direct of indirect voortvloeien uit uw vertrouwen op de informatie en het materiaal op deze website.