Buitengewone verdiensten van ultragevoelige ELISA met Thio-NAD-cycli bij het bepalen van het dengue NS1-eiwit
01 januari

Buitengewone verdiensten van ultragevoelige ELISA met Thio-NAD-cycli bij het bepalen van het dengue NS1-eiwit


1. Inleiding

Knokkelkoorts is een acute infectieziekte die wordt veroorzaakt door de Het virus van de knokkelkoortsdoor de beet van een besmette mug van de Aedes-soort (Ae. aegypti of Ae. albopictus), met als belangrijkste symptomen hoge koorts, duizeligheid, hoofdpijn, huiduitslag en Ernstigpijnen (oog-, spier-, gewrichts- of botpijn), enz. Deze ziekte komt veel voor in tropische en subtropische klimaten. Naar schatting 100 tot 400 miljoen mensen raken elk jaar besmet, waarvan meer dan 80% meestal mild en asymptomatisch is. Desalniettemin kan ernstige knokkelkoorts het risico op overlijden verhogen als het niet goed wordt behandeld. Een vroege diagnose van deze ziekte is dus belangrijk voor de tijdige behandeling.

Opmerkelijk is dat niet-structureel eiwit 1 (NS1), een sterk geconserveerd glycoproteïne, voornamelijk wordt uitgescheiden tijdens de infectie van Dengue virus, die intensief wordt beschouwd als de belangrijkste pathogenesefactor van Dengue. Daarom wordt NSI over het algemeen gebruikt als biomarker voor de vroege opsporing van deze ziekte.

In deze studie werd een sandwich-enzymgekoppelde immunosorbenttest uitgevoerd(ELISA)in combinatie met de thio nicotinamide adenine dinucleotide (thio-NAD/S-NAD) Cyclus methode (hierna ultragevoelige ELISA genoemd) wordt gebruikt om NSI te detecteren, gevolgd door de vergelijking met NAAT om de detectienauwkeurigheid te bevestigen.

2. Voor- en nadelen van traditionele detectiemethoden voor Dengue 

Op dit moment is tHier zijn vier belangrijke detectiemethoden voor Dengue.


Virale isolatie en identificatie hebben een hoge specificiteit, maar zijn tijdrovend en duren ten minste 5 dagen. De snelle antigeentest is de snelste en meest kostenefficiënte van de andere methoden, maar de gevoeligheid en specificiteit zijn relatief laag. Serologische test op basis van IgM en IgG wordt beperkt door het aantal dagen infectie, zoals de De test moet worden uitgesteld totdat het niveau van de antilichamen tot een detecteerbaar niveau is gestegen.

In de kliniek wordt NAAT vaak toegepast om te bepalen Denguedoor vuil van zijn hoge gevoeligheid en specificiteit. Deze methode is echter duur, arbeidsintensief en vatbaar voor valse positiviteit, die moet worden uitgevoerd door het getrainde personeel. Om de nadelen van deze methoden te ondervangen, is een nieuwe detectiemethode ultragevoelige ELISA is toegepast in deze studie.

3. Workflow van ultragevoelige ELISA met thio-NAD-cycli


Een paar antilichamen isgebruikt voor het opvangen van het NS1-eiwit in de sandwich ELISA en alkalische fosfatase isgelabeld op het secundaire antilichaam. Afgezien van de antilichamen, een androsteronderivaat, 3α-hydroxysteroïde dehydrogenase, thio-NAD en NADH zijngebruikt om het thio-NAD-enzymcyclussysteem te construeren. Tijdens de thio-NAD-cyclusreactie accumuleerde thio-NADH constant op een driehoekige getalmanier en kon direct worden gemeten bij een absorptie van 405 nm.

4. De vergelijking van ultragevoelige ELISA en NAAT bij de detectie van Dengue NS1 Protein

In NAAT zijn 60 exemplaren dengue-positief en 25 dengue-negatief. De NAAT-cyclusdrempel (CT) -waarde van die dengue-positieve exemplaren varieerde van 12,42 tot 31,41. In de ultragevoelige ELISA zijn 59 monsters corresponderend positief voor de NAAT-resultaten, terwijl 25 monsters volledig corresponderend negatief zijn voor de NAAT-resultaten.

Vergeleken met NAAT zijn de sensitiviteit en specificiteit van de ultragevoelige ELISA respectievelijk 98,3% en 100% (Tabel 2). Van de 60 NAAT-bevestigde dengue-positieve patiëntmonsters is slechts 1 monster negatief in de ultragevoelige ELISA. Uit de NAAT-gegevens bleek dat het monster een type 4 DENV-infectiegeval is met een CT-waarde van 21,59. De resultaten van de ultragevoelige ELISA komen vrijwel perfect overeen met de NAAT-resultaten, met een kappa-waarde van 0,972 (95% BI: 0,917-1.0).

5. Conclusie

De ultragevoelige ELISA-methode is eenvoudig uit te voeren en vereist geen professionele stagiairs om te werken. De detectie kan direct na ontvangst van een klein monster worden gestart. Het is met name geschikt voor de vroege opsporing van dengue-ziekte in lage-inkomenslanden.

Referentie

Chen, Po-Kai et al. "Geavanceerde detectiemethode voor dengue NS1-eiwit met behulp van ultragevoelige ELISA met Thio-NAD-cycli." Virussen, vol. 15,9, 1894. 8 september 2023, doi:10.3390/v15091894

Productvoordelen en kenmerken van BONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC is ovan de weinige ondernemingen in Chinadie Thio-NAD kan producerenmet "Bonzyme"Hele enzymatische methode(Milieuvriendelijk;Geen schadelijke resten van oplosmiddelen) en unieke "Bonpure" zevenstaps zuiveringstechnologie. BONTAC verweeft R&D, productie en verkoop met eigen fabrieken en een aantal internationale certificeringen om een hoge kwaliteit en stabiele levering van producten te garanderen.


Disclaimer

BONTAC is niet verantwoordelijk voor claims die direct of indirect voortvloeien uit uw vertrouwen op de informatie en het materiaal op deze website.