Een wetenschappelijke methode voor het kwantificeren van NMN in biologische monsters
1. Inleiding
Aanvulling vanNicotinamide mononucleotide (NMN)om deNiveau vannicotinamide adenine-dinucleotide (NAD+)is onthuld als een veelbelovende anti-verouderingsinterventie. Toch is het nog steeds een serieuze uitdaging om nauwkeurig te zijnkwantificeer NAD+ tussenproducten, NMN in het bijzonder. Deze studie is mogelijk om een nieuwe methode te introduceren, de dubbele isotoop-gemedieerde LC-MS/MS-methodologie (dimeLC-MS/MS), voor de precieze kwantificering vanNMN In biologische monsters.2. Factoren die de nauwkeurige detectie van NMN beïnvloeden
NMN is moeilijk nauwkeurig te detecteren vanwege de kwetsbaarheid voor enzymatische stoffendegradatie, conversie in monsterverwerking, het complexe gedrag ervan onder verschillende kolom- en extractieomstandigheden, evenals het matrixeffect.
Specifiek heeft NMN de eigenschappen van hoge polariteit en lage vluchtigheid, wat gemakkelijk op te lossen is in water maar moeilijk op te lossen in organische oplosmiddelen. Deze eigenschappen beperken de toepassing van veel conventionele kwantitatieve analysemethoden sterk.
BIologische voorbeeldenzoals bloed draagt belangrijke activiteiten van CD38 en CD73 (ecto-5’-nucleotidase), die beide NMN als substraat kunnen gebruiken.
Het gedrag van NMN in de kolom is zeer complex, waarschijnlijk vanwege de bipartiete aard van de ladingen, waardoor subtiele verschillen in extractie- en kolomcondities de betrouwbare en nauwkeurige detectie van NMN aanzienlijk beïnvloeden.
3. Copingstrategieën vandimeLC-MS/MS om de impact van impactfactoren te verminderen
Om interferentie van bovengenoemde factoren te vermijden, is een prototypeKolomNMN-2 wordt toegepast. Deze columnbevats C18-gebaseerde hoogzuivere silicadeeltjes die beter in staat zijn hydrofiele verbindingen te binden dan koolstofdeeltjes, wat het vermogen tot scheiding verbetert.Perchloorzuur (PCA) wordt gebruikt omdat het kan efficiënt NAD+ extraheren en NMN uit biologische monsters zoals plasma met minimale verliezen.
Om matrixeffecten aan te passen,a vaste hoeveelheid (1 μM) van elk Isotopische verbindingis toegevoegd aanBiologisch monsters vóór de PCA-extractie.
4. Het voordeels van dimeLC-MS/MS
DOngeveer isotopische NMN-standaarden, NMN (M + 14) en NMN (M + 5), kunnen volgens de LC-MS/MS-gedreven methodologie precies het lot van NMN tijdens monsterverwerking traceren, dieverhoogt aanzienlijk de nauwkeurigheid en betrouwbaarheid van NMN-metingen in biologische monsters. Daarnaast kan dimeLC-MS/MS de extractie-efficiëntie en de absolute concentraties NMN in verschillende soorten biologische monsters evalueren.
5. Conclusie
This nieuwe LC-MS/MS-gedreven methodologie met dubbele isotopische NMN-standaarden kan accuraTely en reliably meet NMN in biologische monsters. Het kan worden gebruikt voor toekomstige studies naar NMN-inname.6. Referentie
Unno, Junya et al. "Absolute kwantificering van nicotinamidemononucleotide in biologische monsters door dubbele isotoop-gemedieerde vloeistofchromatografie-tandem massaspectrometrie (dimeLC-MS/MS)." NPJ AGING VOL. 10,1 2. 2 jan. 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1Waarom kiezenBONTAC?
BONTACis de leider van de mondialeNMNindustrie. We hebben de eerste katalysetechnologie voor volledige enzymen in China en zijn uitgegroeid tot het toonaangevende bedrijf in Co-enzymproducten die veel worden gebruikt in de gezondheidsindustrie, medische en schoonheidsindustrie, groene landbouw, biomedische en andere sectoren. Opmerkelijk isBONTAC is NMNLeverancier van grondstoffen van het beroemde David Sinclair-team aan de Harvard University. Onze diensten en producten zijn betrouwbaar. Bovendien,BONTACheefteen onafhankelijkeCo-enzym Onderzoekscentrum voor Engineering Technology op provinciaal niveau in China en zelfbeheerde fabrieken, waar zuiverheid en stabiliteit van producten kunnen worden gegarandeerd.
