Buitengewone voordelen van ultragevoelige ELISA met Thio-NAD cyclus bij het bepalen van het Dengue NS1-eiwit
1. Inleiding
Denguekoorts is een acute infectieziekte veroorzaakt door deDenguevirus door de beet van een besmette Aedes-soort (Ae. aegypti of Ae. albopictus) mug,met de belangrijkste symptomen zoals hoge koorts, duizeligheid, hoofdpijn, uitslag enernstig pijn (pijn in het oog, spier, gewricht of bot), enzovoort. Deze ziekte komt wijdverspreid voor in tropische en subtropische klimaten. Naar schatting raken jaarlijks 100 tot 400 miljoen mensen besmet, waarvan meer dan 80% meestal mild en asymptomatisch is. Desalniettemin kan ernstige denguekoorts het risico op overlijden verhogen als het niet goed wordt behandeld. Daarom is een vroege diagnose van deze ziekte belangrijk voor de tijdige behandeling.Opmerkelijk is dat niet-structureel eiwit 1 (NS1), een sterk geconserveerd glycoproteïne, voornamelijk wordt uitgescheiden tijdens de infectie vanDengueVirus, die intensief wordt beschouwd als de belangrijkste pathogenesefactor vanDengue. Daarom wordt NSI over het algemeen gebruikt als biomarker voor de vroege opsporing van deze ziekte.
In deze studie werd een sandwich-enzym-gekoppelde immunosorbent-assay gebruikt (ELISA) in combinatie met dethio nicotinamide adenine-dinucleotide (thio-NAD/S-NAD)Cyclische methode (hierna ultragevoelige ELISA genoemd) wordt gebruikt om NSI te detecteren, gevolgd door de vergelijking met NAAT om de detectienauwkeurigheid te bevestigen.
2. Voordelen en nadelen van traditionele detectiemethoden voorDengue
Op dit moment is tHier zijn vier hoofddetectiemethodenvoor Denguekoorts.
Virale isolatie en identificatie hebben een hoge specificiteit maar kosten veel tijd en duren minstens 5 dagen. De Snel antigeen Test is de snelste en meest kostenefficiënte van de andere methoden, maar de gevoeligheid en specificiteit is relatief laag. Serologische tests gebaseerd op IgM en IgG worden beperkt door Het aantal dagen infectie, alsdeDe test moet worden uitgesteld tot het antistofniveau is bereikt stijgt tot een detecteerbaar niveau.
In de kliniek wordt NAAT vaak toegepast om te bepalenDengue door de smerigheid van zijn hoge gevoeligheid en specificiteit. Deze methode is echter duur, arbeidsintensief en vatbaar voor vals-positiviteit, die door het getrainde personeel moet worden uitgevoerd.Om de nadelen van deze methoden te overwinnen, wordt een nieuwe detectiemethode toegepastultragevoelige ELISA is toegepast in deze studie.
3. Werkwijze van ultragevoelige ELISA met thio-NAD cyclus
Een paar antilichamenis gebruikt voor het vangen van het NS1-eiwit in de sandwich ELISA, en alkalische fosfataseis gelabeld op het secundaire antilichaam. Naast de antilichamen zijn er een androsteronderivaat, 3α-hydroxysteroïdehydrogenase, thio-NAD en NADHzijn gebruikt om het thio-NAD enzymcyclussysteem te construeren. Tijdens de thio-NAD cyclische reactie hoopte thio-NADH zich constant op in een driehoekige getalsvorm en kon direct worden gemeten bij een absorptie van 405 nm.
4. De vergelijking van ultragevoelige ELISA en NAAT bij de detectie van het Dengue NS1-eiwit
In NAAT zijn 60 exemplaren dengue-positief en 25 dengue-negatief. De NAAT-cyclusdrempel (CT) van deze dengue-positieve exemplaren varieerde van 12,42 tot 31,41.In de ultragevoelige ELISA zijn 59 exemplaren correspondent positief op de NAAT-resultaten, terwijl 25 exemplaren volledig correspondent negatief zijn voor de NAAT-resultaten.In vergelijking met NAAT zijn de gevoeligheid en specificiteit van de ultragevoelige ELISA respectievelijk 98,3% en 100% (Tabel 2). Van 60 NAAT-bevestigde dengue-positieve patiëntenmonsters is slechts 1 monster negatief in de ultragevoelige ELISA. De NAAT-gegevens toonden aan dat het monster een type 4 DENV-infectiegeval is met een CT-waarde van 21,59. De resultaten van de ultragevoelige ELISA komen vrijwel volledig overeen met de NAAT-resultaten, met een kappawaarde van 0,972 (95% BI: 0,917-1.0).
5. Conclusie
UDe ITA-methode ELISA is eenvoudig uit te voeren en vereist geen professionele trainees om te bedienen. TDe detectie kan direct worden gestart nadat een klein monster is ontvangen. Het is bijzonder geschikt voor de vroege detectie vanDengueziekte in Lage inkomenslanden.Referentie
Chen, Po-Kai et al. "Geavanceerde detectiemethode voor dengue NS1-eiwit met ultragevoelige ELISA en Thio-NAD cycling." Virussen deel 15,9 1894. 8 sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Productvoordelen en kenmerken vanBONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC is oeen van de weinige ondernemingen inChina die Thio-NAD kan produceren, met"Bonzyme" Heel-enzymatische methode (milieuvriendelijk; Geen schadelijke oplosmiddelresten) en unieke "Bonpure" zevenstappen zuiveringstechnologie. BONTAC integreert R&D, productie en verkoop met zelfstandige fabrieken en een aantal internationale certificeringen om hoge kwaliteit en stabiele levering van producten te waarborgen.
